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口腔/咽拭子基因組DNA快速提取操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):8320 更新時(shí)間:2021-03-10

口腔/咽拭子基因組DNA快速提取試劑盒

Rapid Swab DNA Kit

 

 

保存條件:本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果. 蛋白酶 K 可室溫運(yùn)輸,建議-20℃長期保存。

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA 吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),特別適合于從口腔咽拭子中分離純化基因

DNA。各種來源樣品裂解消化處理后 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜(

別配備了 Carrier RNA 可以從體系中輕松捕獲微量核酸,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、

細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的

DNA 無雜質(zhì)和 PCR 抑制劑,可直接適用于PCR 分析。

產(chǎn)品特點(diǎn):

  • 配備了 Carrier RNA 用于充分收集特別微量DNA。
  • 提取的 DNA 純度高,質(zhì)量穩(wěn)定可靠,可適用于各種常規(guī)操作,包括 PCR、酶切、測(cè)序、Southern 雜交等。

注意事項(xiàng):

1. 結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在 37℃水浴幾分

鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2. 避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。

3. Carrier RNA

1) Carrier RNA 使用方法:如果起始處理量很少(口腔咽拭子上收集到的細(xì)胞很少,我們推薦使用 Carrier RNA,如果預(yù)期有較大量 DNA 產(chǎn)量,用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入 Carrier RNA。使用時(shí)每個(gè)樣品提取所需結(jié)合液 CB 中加入 1μl Carrier

RNA 儲(chǔ)存溶液, 將結(jié)合液 CB Carrier RNA 溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液 CB 容易起泡沫,請(qǐng)勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量,在總共需要的結(jié)合液CB 中加入總共需要的 Carrier RNA 混勻備用。混合液在室溫 24 小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

  • Carrier RNA 加入過多造成 DNA 洗脫液中 Carrier RNA 濃度過高,下游 PCR 反應(yīng)可能受干擾,加入過少可能并不能幫助提高 DNA 產(chǎn)量和 PCR 敏感度,因此加入量應(yīng)該在具體試驗(yàn)中調(diào)整以得到-*佳效果。

自備試劑:無水乙醇

操作步驟:

提示:-*次使用前請(qǐng)先在15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇,充分混勻,加入后請(qǐng)及時(shí)在方框

打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!

取樣:取一根醫(yī)用消毒棉簽手不要碰觸脫脂棉部位,伸進(jìn)口腔,緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭20 次(不

時(shí)旋轉(zhuǎn)棉棒,需充分接觸口腔粘膜。

注意事項(xiàng):避免用手觸及棉簽,采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染,取樣前

30 min 內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。

1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下,放入2ml 離心管中,加入400μl 裂解液 ML

2. 再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻渦旋振蕩充分混勻56℃放置 30 min,期間每 10 min 

旋混勻 10 sec

 

3. 加入 400μl 結(jié)合液 CB,立刻渦旋振蕩充分混勻,70℃放置 10 min(擠壓去除拭子, 將盡可能多的裂

 

解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中

如果拭子上細(xì)胞數(shù)量少,導(dǎo)致提取的基因組 DNA 產(chǎn)量過低, 可以在400μl 結(jié)合液CB中加入 1μl Carrier RNA 儲(chǔ)存溶液。

4. 冷卻后加 200μl 無水乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴,收集所有的液體

到管底如果周圍環(huán)境高于 25,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入

 5. 將上一步混合物中加入一個(gè)吸附柱AC (吸附柱放入收集管中,12,000rpm 離心30-60 sec,倒掉收

集管中的廢液。

6. 加入500μl 抑制物去除液IR12,000rpm  離心 30 sec,棄廢液。

7. 加入500μl 漂洗液WB請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!,12,000rpm  離心30 sec,棄掉廢液。

8. 重復(fù)操作步驟 7

9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心2min,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附

材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

10. 取出吸附柱AC,放入一個(gè)干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位 20-50μl 洗脫緩沖液 EB 洗脫緩

沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好, 室溫放置 1 min,12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置1 min,12,000rpm 離心1 min

洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要DNA 濃度較高,可以適當(dāng)減少洗脫體積, 但是小體積不應(yīng)少于 20μl,體積過小降低DNA 洗脫效率,減少DNA 產(chǎn)量。注意:DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解

DNA 濃度及純度檢測(cè)

得到的基因組DNA** 片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收 得到的DNA** 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。

DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當(dāng)于大約50μg/ml 雙鏈DNA、

40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用滅菌水比值會(huì)偏低,因?yàn)?/font> pH 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但并不表示純度低。

 

 

 

                   本產(chǎn)品僅供科研不用于臨床診斷

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

 

免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

 

透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

 

染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

(Label-free)

 

DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞生長曲線的測(cè)定

掃描電鏡服務(wù)

NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

 

慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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