尿素氮（BUN）試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
尿素是生物體內(nèi)含氮化合物分解的終產(chǎn)物，在尿酶催化下分解轉(zhuǎn)化成氨。血液尿素氮是腎功能的主要指標之一。
測定原理
在堿性條件下，尿酶水解尿素產(chǎn)生氨，氨與次氯酸反應(yīng)生成氯胺，再與酚衍生物作用生成綠色吲哚酚，在 630nm 處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 4mL 蒸餾水充分溶解。
試劑二：液體 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體 8mL×1 瓶，4℃避光保存。
樣品處理
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，勻漿后于25℃，10000g 離心10min，取上清待測。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：蒸餾水體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL蒸餾水），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）； 然后 4℃，10000g離心10min，取上清置于冰上待測。
3. 血清或其它液體：直接檢測。
測定操作
| 空白管 | 標準管 | 測定管 |
樣品（μL） |
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| 20 |
標準品（μL） |
| 20 |
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H 2 O（μL） | 20 |
|
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試劑一（μL） | 40 | 40 | 40 |
充分混勻，于 37℃反應(yīng) 10min | |||
試劑二（mL） | 70 | 70 | 70 |
試劑三（mL） | 70 | 70 | 70 |
充分混勻，于37℃顯色10min，于微量石英比色皿/96孔板，雙蒸水調(diào)零，測定630nm處吸光值， 記為A空白管、A標準管和A測定管 | |||
注意：空白管和標準管只需測定一次
計算公式
1. 按樣本質(zhì)量計算
尿素氮含量（mg/g）=(A測定管- A空白管) ÷(A標準管- A空白管)×C 標準品÷W= 0.005×(A測定管- A空白管) ÷(A標準管- A空白管)÷W
2. 按細胞數(shù)量計算
尿素氮含量（mg/104cell）=(A測定管- A空白管) ÷(A標準管- A空白管)×C標準品÷細胞數(shù)量= 0.005×(A測定管- A空白管) ÷(A標準管- A空白管)÷細胞數(shù)量
3. 按液體體積計算
尿素氮含量（mg/L）=(A測定管- A空白管) ÷(A標準管- A空白管)×C 標準品=5×(A測定管- A空白管) ÷(A標準管- A空白管)
C 標準品：標準品濃度，5mg/L；W：樣品質(zhì)量，g
注意事項
1. 配制好的試劑一在2-8℃條件下可保存一周。
2. 最di檢出限為80μg/L。
實驗代做服務(wù)：
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