国产又粗又硬又大又长-北条麻妃人妻av精品-美女美腿丝袜久久久久久-一本久久综合亚洲鲁鲁五月天,-999久久久精品精品-在线日韩精品观看999-超碰亚洲人妻在线91-中文字幕av丝袜美女的诱惑我-91麻豆精品视频在线,av中文字幕在线观看一区二区,av中文字幕凌辱,一区二区三区国产在线成人av

當(dāng)前位置:
首頁 > 技術(shù)文章 > SK-MEL-5 人皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
技術(shù)支持Article
SK-MEL-5 人皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
點擊次數(shù):699 更新時間:2024-05-09

SK-MEL-5 人皮膚惡性黑色素瘤細(xì)胞

,SKMEL5

貨號:YJ-h531(STR鑒定)

價格: 3000.0

規(guī)格: 1*106 

細(xì)胞介紹

SK-MEL-5是從皮膚組織中分離的黑色素瘤細(xì)胞系,所述皮膚組織得自24歲的白人女性惡性黑色素瘤患者。該細(xì)胞系是一種合適的轉(zhuǎn)染宿主,也可作為在患有黑素瘤的患者中檢測黑素瘤特異性抗體的靶細(xì)胞來源。這是T. Takahashi及其同事分離出的一系列非常廣泛的黑色素瘤細(xì)胞系之一。在裸鼠中;形成惡性黑色素瘤。

細(xì)胞特性

1 來源:24 白人 女性惡性黑色素瘤

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣,貼壁生長

3 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

11mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。                      

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1 準(zhǔn)備MEM(推薦YJ-0012)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%

2 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二. 細(xì)胞處理

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實驗技術(shù)服務(wù):

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

720高清视频观看 国产精品久久久久亚洲av-伊人大香蕉狼人干伊网-肉体公尝HD中文字幕-熟女15p | 国产黑人一区二区三区在-一区二区三区在线 最热电视剧-一本大道黑丝视频-五十路女优 | 精品三级片 黄色片久久久久久久久久久久久久久久-免费追剧在线观看 黑狐策驰影院免费-三年电影高清在线观看迅雷下载-97性逼干老逼 | 99er思思这里有精彩视频-国产精品四虎-h文细节剧情在线看-jZZijZZij亚洲日本少妇 | 蜜月av强奸乱伦-国产真人做受免费视频 欧美乱日-思春网男日女捌视频-中国美女黑丝毛片 | 东京热AV片 中文字幕丰满乱子伦无码-久久久2021中文字幕-今晚调教到她乖为止h-H1V1视频 | 妃光莉中文字幕一区-农村妇女毛片精品久久久-一级二级HD-HD日本电影免费 99在线精品免费视频九九视 | 东北农村妇女操逼录像-人妻胸大逼紧靠逼视频网站-亚洲码欧美码一区二区三区-扒开女人内裤猛进猛出免费视频 | 亚洲情色五月天-北条麻妃美痴女olのぶっか-剧情片免费高清观看 爆亚乳一区二区-插b内射18免费视频 | 日韩专区第二页-fee性满足He牲BBw少妇-东北女人一级A毛片-久久久久99精品国产片 | 自慰免费看-超碰在线进入-双渗透亚洲可爱的-女人自慰网站免费看W | 最近最新中文字幕mv免费版-高清日韩免费观看 精品国产三级a-美女又爽 又黄 免费网站在线观看-又爽又黄的视频 | 操逼喷水视频-亚洲毛茸茸-偷拍无码视频-熟女中出在线 | 德国AV在线-高清高清在线 国产色爱av资源综合区-国产免费一区二区三区三州老师视频-久久春色 | 国产精欧美一区二区三区久久-网站一区二区三区无码-国产?v无码专区亚洲?v果冻传媒-26uuu热门同人作品 | 中文字幕一级毛片无码-人人澡人人乐人人看-伊人春色视频-东北熟女chinese4p交换 | 无码一区免费在线不卡-四虎单身女伦理家家庭亻仑理视频-xxxxxchinahdm-美女自慰网站大全 | 人妻魔镜精油按摩中出-国产无毛嘘嘘-国产精品jizz-日韩无码免费 亚洲 自拍 欧美 一区 | 北条麻妃亚洲一区二区-校园春色亚洲欧美婷婷另类-BD英语电影完整版 卡3卡4卡国色天香九零-大码丰满老熟女AV | 熟女自慰网站-老熟美妇一区二区-ヘンリー冢本と熟女在线观看-777久久久风间由美 | 九色|PORNY|露脸人妻-综合视频一区二区三区-殴美日韩国产精品-中文在线网在线中文 | 初撮り六十路100本-又粗粗又大人人爽A片-videos强制睡熟迷奷-欧美久久一级内射wwwwww | 白嫩尤物娇喘欲仙欲死91-亚洲欧美日韩精品综合网-日日日干干干-久久激情小说 | 熟女自慰网站-老熟美妇一区二区-ヘンリー冢本と熟女在线观看-777久久久风间由美 | 2025污视频在线免费观看-亚洲 欧美 国产 日韩 熟女-亚洲国产精品一区二区首页-新婚之夜偷拍夫妻生活视频 | 51AV影院啪影院-中国人黄色录像-66m-66摸成人视频-人妻熟女-五月丁香she38p | 国产成人毛片亚洲精品不卡-国产亚洲中文日本不卡2区-强被迫伦姧惨叫完整免费观看-bbw喷白浆 | 五十路肥臀老熟女BBw-日韩电影第二页-好吊艹视频-日本一男一女搞黄九一 | 一道本不卡高清无码-亚洲电影手机在线五月-7799天天综合网精品-C到她直喷奶 | 8060yy中文字幕无码视频-91精品国产中文字幕夏目彩-伊人影院焦久-中文字幕黑人 | 天天干B-色翁荡息又大又硬又粗又苏玥-麻妃……欧美裸照片-久别的草原在线影院播放免费 | 中亚欧美精品免费观看-在线播放免费人成毛片软件-可以免费看女生下面的网站-校园激情男人的天堂 国产美女高潮欲仙欲死-亚洲裸体多毛xxxxxxxx-国产一区日韩二区欧美三区 xxxx69hd老师-去干网黄色 | 国语对白露脸老太HD-国产剧高清视频观看-全集剧情片 厨房挺进旗袍班主任-黑人3p波多野结衣之皇 欧美精品一二三四五六-精品裸体舞一区二区视频-四川BBBB搡BBB搡B1图-成人午夜免费电影 | 影音先锋色小姐-神马影院手机在线观看 国产丰满成熟女性性满足视频-女的自慰过程未遮挡-天然巨大乳BBWSex日本 | 老熟妇1老熟女-最佳影片-91Porn-久久91精品国产91久久小草 -538少妇 | 黑人解禁中文字幕在线观看-性xxxx18免费观看视频 久久久精品免费-青青青国产成人久久111网站-国产婬语对白麻豆 | 荡女妇边被c边呻吟久久网-中文字幕视频第二页-美女裸体网站国产-人妻含泪被黑人进入 | 欧美久久久影院老阿姨-性感美女视频一区二区精品-国内美女自慰片-国产亚洲aaa 91久久免费视频 | www露双乳球-北条麻妃加勒比人妻-另类综合专区-双龙孕妇H啊~嗯啊H动漫 | 伊人一本在线-久久情爱网-中文字幕在线亚洲-亚洲?v套图一区二区亚洲熟妇中文字幕 | 黑人巨大マラvs北条麻妃-草莓视频app色版-操亚洲老熟女老情人-东京热黄色网 |